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小鼠基因型鑒定試劑盒 
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聲明: 僅用于科學研究,不得用于臨床診斷或治療
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小鼠基因型鑒定試劑盒說明書

Mouse Genotyping Kit Manual


產品簡介

本產品包含DNA粗提取及PCR擴增的整套試劑,適用于小鼠基因型快速鑒定。該產品可從小鼠尾巴、腳趾或耳朵等組織中快速提取基因組DNA,無需進行組織勻漿、DNA的抽提沉淀、吸附柱法或磁珠法純化等操作,產物可直接用于PCR擴增,顯著簡化實驗流程。


表1 基因型鑒定試劑盒產品明細

序號

組分

YDG01-10

YDG01-20

YDG01-50

YDG01-100

保存溫度

1

Lysis Buffer*

0.5 mL

1 mL

2.5 mL

5 mL

室溫

2

Proteinase K

30 μL

60 μL

150 μL

300 μL

-20℃

3

2 × Taq Mix (with Dye)

0.1 mL

0.2 mL

0.5 mL

1 mL

-20℃

* 該組分低溫時會出現結晶,37℃水浴加熱或室溫溶解至澄清透明狀即可使用,后續置于室溫保存。


操作流程

1. DNA提取

1.1 采樣:鼠尾尖2~3 mm,鼠耳2~5 mm2,腳趾1枚。采樣后若不立即進行樣品消化,需保存于-20℃或更低溫度,在消化前避免反復凍融。

1.2 消化液配制:每個樣本按照47 μL Lysis Buffer和3 μL Proteinase K配制樣本消化液。

1.3 樣本消化:確保消化液完全浸沒樣本后,可選擇以下方法進行樣本的消化。

表2 消化方式


儀器

操作

方法一

烘箱

55℃過夜消化

方法二

恒溫搖床

56℃,250 rpm消化10 min,渦旋混勻儀振蕩10 s

1.4 滅活:消化完成的樣本,于PCR儀99 ℃處理10 min以滅活蛋白酶K,隨后冷卻至室溫或4℃。

1.5 稀釋:滅活完成的樣本加130 μL的ddH2O以稀釋DNA,隨后混勻,2000 rpm離心1 min將消化剩余的毛發、骨頭等固態雜質離心于管底,后續PCR試驗取上清作為模板。

1.6 保存:提取的DNA產物可短期保存于4 ℃,長期可置于-20 ℃或更低溫度,避免反復凍融。


2. PCR擴增

表 3 PCR體系

Reaction Component

Volume (μL)

Genomic DNA

1

2× Taq Mix (with Dye)

10

Forward Primer (10 μmol/L)

0.5

Reverse Primer ( 10 μmol/L)

0.5

ddH2O

補足至20

2.1 引物:上下游引物可預混到一起作為Primer mix,使用時加1 μL即可。

2.2 PCR mix:建議先配制預混液,即將ddH2O、2× Taq Mix和Primer mix預混。建議計算約5%富余量,例如100份樣品配制105份試劑。

2.3 加樣:將19 μL PCR mix分裝至PCR八連管或96孔PCR板后,再分別加入1 μL DNA上清。

2.4 混勻:扣緊管蓋或封膜后渦旋振蕩5 sec,離心10 sec。

2.5 上機:使用普通PCR儀進行擴增。根據自身需求選擇表4的Touchdown程序或表5的常規PCR程序。


表4 Touchdown程序

Step

Temp

Time

Note

1

95 °C

5 min

Denature

2

95 °C

20 sec

Step3: -0.5℃ per cycle decrease.

Repeat steps 2-4 for 10 cycles

3

60 °C

20 sec

4

68 °C

1 min / 1 kb

5

95 °C

20 sec

Repeat steps 5-7 for 26 cycles

6

55 °C

20 sec

7

72 °C

1 min / 1 kb

8

72 °C

5 min

Post extension

9

10 °C

2 min

Hold


表5 常規PCR程序

Step

Temp

Time

Note

1

95 °C

5 min

Denature

2

95 °C

20 sec

Repeat steps 2-4 for 35 cycles

3

?*

20 sec

4

72 °C

1 min / 1 kb

5

72 °C

5 min

Post extension

6

10 °C

2 min

Hold

* 根據設計的引物選擇合適的退火溫度,通常為引物Tm值減5℃。


2.6 電泳:PCR產物可根據條帶大小,選擇不同濃度的凝膠進行電泳,后續根據電泳結果進行基因型分析。


 

友情鏈接:
聯系電話:027-87707448  總部湖北省武漢市洪山區關山街道珞喻東路4號慧谷時空2508,分部實驗基地:鄂州市華容區東湖高新智慧城11棟
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